BioximiaForYou

Amylase

Alpha-amylase (diastase, alpha-1,4-glucan-4-glucan-hydrolase) tergolong dalam kelas hidrolase yang memangkinkan hidrolisis polisakarida, termasuk kanji dan glikogen, kepada dextrin dan di- dan monosakarida mudah (maltosa, glukosa).

Amilase dalam kepekatan terbesar adalah dalam pankreas dan kelenjar air liur, masing-masing - dalam bentuk isoenzim pankreas dan saliva. Di bawah keadaan fisiologi, amilase serum terdiri daripada 40% amilase pankreas dan 60% amilase saliva. Menggunakan inhibitor tertentu atau pemisahan oleh elektroforesis, adalah mungkin untuk menentukan asal-usul enzim yang terdapat dalam plasma. Amilase dikeluarkan dari plasma oleh buah pinggang dan diekskresikan dalam air kencing. Ini membawa kepada kandungan maklumat yang lebih besar yang menentukan aktiviti alfa-amilase dalam air kencing sebagai ujian yang menilai keadaan fungsi pankreas. Pertumbuhan aktiviti amilase adalah sangat penting dalam diagnosis penyakit pankreas.

Nilai klinikal dan diagnostik:

Aktiviti darah alpha-amylase dan air kencing bervariasi pada siang hari.

Hyperamalasemia - peningkatan dalam aktiviti amilase dalam serum darah.

Ø Pankreatitis akut - nilai maksimum berlaku dalam 6 hingga 12 jam pertama selepas permulaan simptom penyakit. Selepas masa ini, aktiviti enzim menurun, menormalkan dalam 2-5 hari. Jika aktiviti tetap meningkat selama lebih daripada 5 hari, ini menunjukkan peningkatan keradangan.

Ø Ekspresi pada pankreatitis kronik

Ø Penembusan ulser duodenal

Ø Obstruksi usus

Ø Apendisitis akut

≈ Alkaloid (morfin, heroin, kodin)

Ø Keracunan metanol

Ø Dos besar etanol (untuk alkoholik)

Hypoamylasemia - penurunan dalam aktiviti amilase dalam serum darah (praktikalnya tidak mempunyai nilai diagnostik).

Ø Nekrosis pankreas

Ø Infark miokardium

Hyperamalazuria - meningkatkan ekskresi amilase dalam air kencing.

Ø Pankreatitis akut - peningkatan aktiviti enzim diperhatikan semasa 24 jam pertama keradangan. Peningkatan enzim dalam air kencing bertahan selama 7 hingga 10 hari akan datang, walaupun hakikat bahawa aktiviti amilase dalam darah selepas 3-4 hari adalah normal.

Ø Kanser pankreas

Ø Penembusan ulser duodenal

Ø Penyakit batu karang

Ø Penyakit kelenjar air liur, parotitis, batu di salur air salur

Hypoamylase - penurunan dalam pembebasan amilase dalam air kencing.

Ø Penyakit buah pinggang

Ø Penyakit hati

"Penentuan aktiviti alfa-amilase dalam cecair biologi oleh kaedah Karavey bersatu"

Prinsip: di bawah tindakan alpha-amylase, kanji dihidrolisiskan untuk membentuk produk yang tidak memberikan reaksi warna dengan iodin. Keamatan pengurangan warna kompleks pati yodium per unit masa adalah berkadar dengan aktiviti enzim.

Bahan yang disiasat: serum segar, air kencing.

Kit termasuk:

Reagen №1 - penampan

Reagen No. 2 - substrat tertumpu

Reagen №3 - penyelesaian yodium pekat

Reagen No. 4 - larutan kalium fluorida

Reagen No. 5 - asid hidroklorik

Penyediaan reagen untuk prosedur analisis:

Penyelesaian kerja substrat: campuran reagen No. 1 dan No. 2 dalam nisbah 24: 1.

Larutan kerja iodin: campuran air sulingan, reagen No 3 dan reagen No 4 dalam nisbah 7: 1: 2.

Larutan kerja asid hidroklorik: cair kandungan botol nombor 5 dengan air suling sebanyak 16 kali.

Kursus penentuan:

Reagen

Sampel berpengalaman

Kawalan sampel

BioXplorer

Amylase

α-Amylase [α - (1,4) -glucan-4-glucanohydrolase, KF 3.2.1.1] adalah enzim yang menghidrolisis ikatan 1,4 α-glikosidik dalam kanji, glikogen dan polimer glukosa lain. Pada manusia, sumber utama α-amylase adalah pankreas dan kelenjar air liur. Banyak bentuk isoform yang diasingkan daripada cecair biologi dan tisu manusia mungkin merupakan produk heterogen perubahan pasca-translasi daripada dua keluarga amilase isoenzim, sintesis yang dikodkan oleh dua lokus gen Atu-1, salivary (C) jenis amilase dan Atu-2, pancreatic (P) jenis enzim, berkait rapat dalam kromosom 1. Enzim isoenzim C dan P tidak mempunyai perbezaan besar dalam komposisi asid amino. Dua isoforms telah diasingkan oleh penapisan gel pada Sephadex dalam pecahan C-amylase, salah satunya mengandungi karbohidrat. Jisim molekul karbohidrat yang mengandungi isoforms, 57 kDa, bebas karbohidrat - 55 kDa. Mata Isoelektrik daripada isoforms utama C-isoamylases dari 5.5 hingga 6.5. Kumpulan p isoamylase mempunyai berat molekul yang lebih rendah (53 kDa) dan tidak mengandungi karbohidrat. Titik isoelektrik protein ini berkisar antara 5.7 hingga 7.0.

Mendapat bukti bahawa p-jenis amilase hanya terbentuk di pankreas adalah tidak adanya isoenzyme ini pada individu dengan pancreathectomy total. Sebaliknya, α-amilase C-isoenzyme dapat disintesis dalam pelbagai organ dan tisu. Aktiviti tinggi C-amylase diperbaiki dalam tisu tiub fallopi dan kandungan sista ovari. Kumpulan khusus isoamilases yang dihasilkan oleh tisu organ genital wanita tidak dikesan dalam serum atau air kencing orang yang sihat; pengedaran isoamilases adalah sama dalam lelaki dan wanita. Isoamylases kepunyaan kumpulan C juga terdapat dalam susu manusia dan cecair luka.

Kepentingan klinikal menentukan aktiviti amilase dalam serum.

Penentuan aktiviti serum α-amilase adalah ujian yang paling biasa untuk mendiagnosis pankreatitis akut. Dalam pancreatitis akut, aktiviti enzim dalam serum meningkat 3-12 jam selepas serangan yang menyakitkan, mencapai maksimum selepas 20-30 jam, dan kembali normal dengan kursus yang baik dalam masa empat hari. Aktiviti α-amylase (diastase) dalam air kencing meningkat 6-10 jam selepas peningkatan aktiviti serum dan pulangan normal, paling kerap tiga hari selepas kenaikan.

Kini diketahui secara meluas bahawa peningkatan dalam keseluruhan aktiviti α-amylase tidak khusus untuk pankreatitis dan penyakit pankreas lain. Kajian klinikal menunjukkan bahawa peningkatan aktiviti α-amilase berlaku dalam beberapa penyakit, termasuk penyumbatan usus, penyakit saluran empedu, usus buntu, parotitis, dan kehamilan ektopik. Kepekaan dan kekhususan menentukan α-amylase dalam diagnosis pankreatitis akut meningkat dengan perubahan dalam batas-batas nilai normal (tahap diskriminasi norma dan patologi adalah aktiviti 1.5-2 kali lebih tinggi daripada batas atas norma). Dalam kes ini, penentuan aktiviti α-amilase adalah yang paling bermaklumat pada hari pertama perkembangan pankreatitis akut. Menurut beberapa penulis, penentuan aktivitas serum α-amilase dalam pankreatitis kronik tidak mempunyai nilai diagnostik.

Pada manusia, α-amylase, yang melepasi bebas melalui penghalang penapisan badan buah pinggang, menyerap semula sel-sel epitelium tubulus buah pinggang dengan cara yang sama seperti protein serum berat molekul rendah yang lain. Peningkatan aktiviti amilase serum mungkin disebabkan oleh penghapusan enzim terjejas. Contohnya ialah keadaan yang dipanggil makroamilasemia, apabila enzim terikat pada imunoglobulin serum dan membentuk kompleks makromolekul. Kompleks seperti itu tidak ditapis ke dalam air kencing dan tidak boleh dikeluarkan dengan menggunakan sebarang mekanisme lain, yang menyebabkan peningkatan yang signifikan dan kadang-kadang berpanjangan dalam aktiviti α-amilase dalam serum darah. Macroamylasemia berlaku pada orang yang sihat dengan kekerapan 1%, pada individu dengan hiperamilasemia dengan frekuensi 2.5%. Macroamylasemia boleh didiagnosis dengan kaedah ultracentrifugation, EF, kromatografi gel, ujian sederhana pemendakan kompleks dengan polietilen glikol juga telah dicadangkan.

Aktiviti serum α-amilase sering meningkat dalam kegagalan buah pinggang, tetapi tidak sepenuhnya jelas apa yang menyebabkan peningkatan ini - peningkatan pembentukan enzim atau pengurangan penghapusannya. Dalam kes sedemikian, maklumat tambahan boleh diberikan dengan menentukan kadar ekskresi α-amilase atau pengiraan pelepasan enzim.

Menurut banyak penulis, ujian yang paling sensitif dan spesifik untuk diagnosis pankreatitis adalah tahap aktivitas dari P-isoenzyme α-amylase. Ujian ini amat penting jika aktiviti amilase keseluruhan biasa dijumpai dalam pesakit dengan diagnosis pankreatitis yang diandaikan. Dengan mengurangkan aktiviti P-amylase, pankreatitis kronik boleh didiagnosis. Peratusan P-isoamilase dalam jumlah aktiviti α-amilase jauh lebih tinggi dalam air kencing daripada dalam serum, mungkin disebabkan perbezaan ekskresi isoenzim oleh buah pinggang. Walau bagaimanapun, nilai diagnostik untuk menentukan aktiviti isoenzim α-amylase dalam air kencing adalah lebih rendah daripada itu dalam darah.

Eksperimen - kaedah asas sains
Kedua-dua pemerhatian dan pengukuran disertakan dalam kaedah sains asas yang kompleks seperti eksperimen. Berbeza dengan pemerhatian, satu percubaan dicirikan oleh campur tangan seorang penyelidik dalam posisi objek yang sedang dikaji, dengan pengaruh aktif pada subjek.

Tanah adalah komponen unik biosfera
Pada akhir abad ke-19. V. Dokuchaev, ahli sains semulajadi Rusia yang hebat, dengan kajiannya terhadap chernozem dan tanah lain di Lembah Rusia dan Caucasus, menegaskan bahawa tanah adalah badan semula jadi dalam ciri luaran dan sifat kekuatan mereka.

Analisis air kencing
Urinalisis adalah siri ujian kimia dan fizikal, hasilnya menunjukkan graviti dan pH sampel dan kehadiran dan tahap darah, glukosa dan komponen lain dalam sampel. Sejak data asas dalam kegagalan buah pinggang kronik dan menerima.

Amylase

α - Amilase (diastase, 1,4 - a - D - glucan hydrolase, EC 3.2.1.1.) memangkinkan hidrolisis ikatan α - 1,4 - glukosida kanji, glikogen dan polisakarida yang berkaitan dengan maltosa, dextrin dan polimer lain. Jisim molekul enzim adalah kira-kira 48,000 D. Molekul ini mengandungi atom kalsium yang bukan sahaja mengaktifkan enzim, tetapi juga melindunginya dari tindakan protease, dan aktiviti amilase meningkat dengan pengaruh ion klorin. Dalam darah, ia diwakili oleh dua isoenzim: pankreatik - P-jenis dan saliva - S-jenis, masing-masing dibahagikan kepada beberapa pecahan. Isenzyme S-jenis biasanya 45-70% (purata 57%), selebihnya adalah dalam P-jenis. Kedua-dua isoenzim mempunyai ciri-ciri katalitik dan imunologi yang hampir sama, sedikit berbeza dalam pergerakan electrophoretic, tetapi juga dipisahkan dengan penapisan gel pada DEAE - Sephadex. Terdapat juga makroamilase, yang tidak diekskresikan oleh buah pinggang, tetapi boleh didapati dalam serum darah normal (kira-kira 1% orang yang sihat) dan patologi (2.5%).

Aktiviti amilase tinggi diperhatikan dalam parotid dan pankreas. Walau bagaimanapun, aktivitinya, walaupun jauh lebih rendah, terdapat dalam usus besar dan kecil, otot rangka, hati, buah pinggang, paru-paru, tiub fallopi, tisu adipose. Dalam darah, enzim dikaitkan dengan kedua-dua protein plasma dan membentuk unsur. Aktiviti enzim adalah sama bagi lelaki dan wanita dan tidak bergantung kepada jenis makanan yang diambil dan masa hari.

Kaedah yang sedia ada untuk mengkaji aktiviti a-amilase dalam cecair biologi dibahagikan kepada dua kumpulan besar:

1. Saccharifying (reductometric), berdasarkan kajian gula yang terbentuk daripada kanji dengan mengurangkan kesan glukosa dan maltosa.

2. Amyloclastic, berdasarkan penentuan residu kanji tepukan:

• mengikut tahap keamatan tindak balasnya dengan iodin. Kaedah ini lebih sensitif dan spesifik, tetapi ketepatan mereka sebahagian besarnya bergantung kepada kualiti kanji dan pengoptimuman syarat penentuan.
• penggantungan kelikatan kanji, tidak mempunyai ketepatan yang tinggi dan tidak digunakan sekarang.

3. Kaedah-kaedah yang menggunakan substrat kromogenik - adalah berdasarkan kepada penggunaan substrat - bahan pewarna, yang di bawah tindakan α - amilase hancur untuk membentuk pewarna larut air.

4. Kaedah berdasarkan reaksi enzim yang digabungkan:

Pati + H₂Mengenai Maltose + Maltotriose + Dextrin

Maltose + N₂Sekitar 2 glukosa

Glukosa + ATP Glukosa - 6 - F + ATP

Glukosa-6-F + NADF Gluconate-6-F + NADFN

Aktiviti enzim ditentukan oleh kadar pengumpulan NADPH.

Kaedah amyloclastic diluluskan sebagai bersatu: Karavey (dengan substrat kanji tahan) dan Smith-Rohe.

Penentuan aktiviti amilase dengan bernoda
substrat untuk syarikat pengambilan "Lachema"

Prinsip

α - Amilase mempelbagaikan hidrolisis daripada substrat kanji berwarna tidak larut untuk membentuk pewarna larut air biru. Jumlah pewarna yang dilepaskan adalah berkadar dengan aktiviti pemangkin enzim.

Penentuan aktiviti alfa-amilase.

Alpha-amylase (diastase) adalah enzim yang melakukan pembelahan hidrolik polisakarida kepada dextrins, maltosa dan glukosa. Produk akhir amilase tidak memberi reaksi warna dengan iodin. Kelenjar pankreas dan kelenjar liur terkaya di amilase. Amilase disembur ke dalam darah terutamanya dari organ-organ ini.

Plasma darah manusia mengandungi dua jenis amilase: pankreas dan saliva; jenis amilase ketiga adalah besar atau makroamilase. Dengan air kencing, amilase pankreas terutamanya dikumuhkan, yang merupakan salah satu sebab mengapa penentuan amilase urin lebih bermaklumat daripada darah untuk menilai keadaan fungsi pankreas. Adalah dipercayai bahawa 65% daripada aktiviti amilase air kencing adalah disebabkan oleh amilase pankreas, manakala 60% daripada aktiviti amilolitik serum disediakan oleh amilase kelenjar air liur. Dalam pankreatitis akut, amilase pankreas meningkatkan serum menjadi 89%, dan dalam air kencing hingga 92% tanpa menukar indeks amilase saliva.

Aktiviti amilase dalam darah dan air kencing menjalani perubahan ketara sepanjang hari, dan juga perbezaan individu. Penurunan aktiviti amilase memerlukan kajian dalam air kencing setiap hari untuk menilai fungsi pankreas.

Kaedah sedia ada untuk menentukan aktiviti α-amilase dibahagikan kepada 2 kumpulan:

1. Kaedah titik akhir adalah berdasarkan menentukan residu kanji yang tidak dicerai mengikut tahap intensiti tindak balasnya dengan iodin (kaedah Karavey).

2. Kaedah kinetik.

serum α-amylase - 16-30 g / h * l

air kencing α-amilase - 28-160 g / h * l

1. Serum tidak boleh hancur.

2. Syarat eksperimen sangat penting, khususnya waktu inkubasi selama 5 minit, jadi tidak disarankan untuk melakukan kajian serentak lebih daripada 5 sera.

3. Penentuan aktiviti α-amilase dalam air kencing dilakukan sama dengan penentuan dalam darah, bagaimanapun, dalam hal hiperamilase, disarankan untuk mencairkan air kencing dengan pengiraan semula berikutnya.

4. Aktiviti α-amylase dipengaruhi oleh ubat - antibiotik, ubat penahan sakit, dan juga alkohol.

Peningkatan aktiviti amilase, terutamanya berlaku dalam penyakit pankreas.

Dalam pancreatitis akut, aktiviti enzim dalam darah dan air kencing meningkat lebih daripada 10 kali. Hyperamalasemia berlaku sejurus selepas permulaan penyakit, mencapai maksimum sebanyak 12-24 jam, selepas itu aktiviti enzim cepat berkurang dan normal hingga 2-6 hari. Biasanya, hipramilazuria berlangsung lebih lama daripada peningkatan aktiviti enzim dalam serum, oleh itu, selama 2-3 hari selepas serangan yang menyakitkan, lebih informatif untuk menentukan aktiviti α-amilase dalam air kencing.

Dalam pankreatitis kronik, kanser pankreas, peningkatan aktiviti enzim tidak begitu ketara. Di samping itu, terdapat peningkatan sedikit aktiviti enzim dalam penyakit yang disertai dengan gambaran klinikal yang sama dengan pankreatitis akut: apendisitis akut, peritonitis, ulser gastrik berlubang, dan sebagainya.

Oleh kerana itu, amilasiemia diucapkan untuk membezakan pankreatitis akut dari penyakit kronik pankreas, serta dari penyakit akut lain rongga perut.

Hampir selalu amilazemia ditemani oleh amylazuria. Tetapi penentuan aktiviti amilase air kencing adalah penunjuk diagnostik yang kurang tepat, sejak pembebasan amilase dalam air kencing dikaitkan dengan fungsi buah pinggang. Peningkatan sedikit dalam amilase dalam darah semasa mengurangkan tahap dalam air kencing dapat dijelaskan oleh pelanggaran fungsi perkumuhan buah pinggang.

Pengurangan aktiviti amilase diperhatikan dengan nekrosis pankreas, penyakit hati (hepatitis, sirosis), luka bakar yang meluas, kencing manis, cachexia, dan sebagainya.

194.48.155.252 © studopedia.ru bukan pengarang bahan yang diposkan. Tetapi menyediakan kemungkinan penggunaan percuma. Adakah terdapat pelanggaran hak cipta? Tulis kepada kami | Maklumbalas.

Lumpuhkan adBlock!
dan muat semula halaman (F5)
sangat diperlukan

Penentuan amilase dalam cecair biologi

Amilase dalam darah dan apakah paras penunjuk ini adalah normal

• Apakah enzim ini?
• Kaedah untuk menentukan
• Norma
• Sebab-sebab peningkatan ini
• Kurangkan

Salah satu komponen penting dalam analisis biokimia darah ialah kajian aktiviti enzimatiknya. Ini menentukan kepekatan plasma pelbagai enzim, yang kebanyakannya dihasilkan oleh organ-organ tertentu. Keistimewaan jenis ini membolehkan mereka digunakan sebagai kriteria diagnosis untuk pelbagai penyakit yang sempit. Dalam artikel ini, kita akan membincangkan penunjuk seperti kadar amilase, yang merujuk kepada penanda spesifik patologi pankreas.

Apakah enzim ini?

Selama bertahun-tahun, tidak berjaya bergelut dengan hipertensi?

Ketua Institut: "Anda akan kagum betapa mudahnya menyembuhkan hipertensi dengan mengambilnya setiap hari.

Alpha-amylase dianggap sebagai salah satu enzim jus pankreas (pankreas), yang terlibat secara aktif dalam proses pencernaan. Ia dihasilkan oleh sel-sel exocrine dan melalui saluran pernafasan memasuki duodenum, di mana ia bertanggungjawab untuk pemisahan komponen karbohidrat kompleks kepada yang lebih mudah. Mereka terlibat dalam pecahan glikogen dan kanji. Hasil akhir dari tindakan mereka haruslah menghasilkan glukosa mudah, yang dimakan oleh tubuh untuk membayar kembali kebutuhan energi sel-sel.

Tetapi amilase perlu mengalir secara eksklusif ke dalam lumen usus. Biasanya, sejumlah kecil ia memasuki peredaran sistemik, kerana setiap sel dalam proses aktiviti penting mempunyai hubungan langsung dengan darah. Selagi integriti sel pankreas tidak dilanggar, kepekatan enzim tidak melebihi batas norma. Amilase darah kerana aktiviti enzim yang tinggi, yang menjejaskan sebarang tisu badan, boleh menyebabkan kemusnahan mereka. Oleh itu, kuantiti itu harus dikekalkan pada tahap yang tetap.

Untuk rawatan hipertensi, pembaca kami berjaya menggunakan ReCardio. Melihat populariti alat ini, kami memutuskan untuk menawarkannya kepada perhatian anda.
Baca lebih lanjut di sini...

Kaedah dan ujian untuk menentukan aktiviti amilase darah

Amilase dalam darah beredar dengan cara ini: enzim disembuhkan oleh sel-sel pankreas kelenjar, memasuki darah dan dibawa ke semua vesel. Di hati, ia sebahagiannya dinetralkan. Bahagian enzim ini, yang tidak mempunyai masa untuk runtuh, melalui penapis buah pinggang, di mana ia tertumpu dan diekskresikan dalam air kencing. Mekanisme ini adalah asas untuk menentukan kepekatan alpha-amylase dalam pelbagai cecair biologi.

Analisis utama termasuk:

• Analisis biokimia untuk menentukan alfa-amilase darah;
• Analisis biokimia air kencing untuk penentuan amilase air kencing (analisis diastase).

Dalam amalan klinikal, kaedah kedua sering digunakan, kerana secara teknikalnya lebih mudah dilakukan dan tidak memerlukan sampel darah. Di samping itu, ia lebih sensitif dan khusus. Sesungguhnya, dalam jumlah besar darah dan cecair ekstraselular, enzim dalam keadaan yang lebih cair daripada dalam sedikit air kencing. Oleh itu, aktiviti amilase air kencing adalah beberapa kali lebih tinggi daripada plasma darah.

Prestasi biasa

Menilai keputusan analisis, mereka harus dibandingkan dengan standard tertentu. Adalah penting untuk mempertimbangkan bahawa norma membayangkan penilaian dalam unit ukuran tertentu. Oleh itu, pastikan untuk memberi perhatian kepada aksara yang disenaraikan selepas nombor dalam lajur hasil analisis. Selain itu, kadar amilase, seperti yang ditentukan dalam makmal yang berlainan, mungkin berbeza kerana penggunaan reagen sensitiviti yang berbeza. Biasanya, kadar itu ditunjukkan oleh makmal di sebelah hasilnya.

Penunjuk standard yang diterima umum diastase dan alpha-amilase dalam jadual.

Biokimia, yang menentukan aktiviti amilase darah, dicirikan oleh hakikat bahawa kadar amilase pada wanita dan lelaki adalah sama. Hormon seks tidak mempunyai kesan yang signifikan terhadap enzim ini.

Punca dan mekanisme kenaikan tersebut

Tafsiran yang betul tentang hasil analisis untuk menentukan kepekatan amilase dalam plasma atau air kencing dapat membantu dalam diagnosis beberapa penyakit. Dalam amalan klinikal, yang paling kerap ditemui adalah situasi di mana amilase atau diastasis dinaikkan. Ini menunjukkan apa yang berasal:

• Peningkatan aktiviti secretory pankreas;
• Kehadiran halangan dalam saluran pankreas atau mampatan mereka, yang merumitkan aliran keluar jus pankreas yang mengandungi amilase;
• Kesopanan tisu pankreas adalah proses traumatik, radang, nekrotik (merosakkan) atau neoplastik.

Oleh itu, peningkatan dalam darah alpha-amylase dan diastase air kencing merujuk kepada penanda spesifik untuk penyakit pankreas dan salurnya:

1. Dengan peningkatan pankreatitis kronik;
2. Dengan pankreatitis akut, nekrosis pancreatic focal (pemusnahan tisu kelenjar melalui enzim), penyusupan peripancreatic, atau pada peringkat awal nekrosis pankreas yang teruk;
3. Kanser pankreas. Kadar amilase melebihi tahap yang lebih tinggi apabila tumor terletak di kepala dan badan organ;
4. Pelbagai jenis cholelithiasis dengan choledocholithiasis (penghijrahan batu ke dalam saluran hempedu);
5. Kekalahan puting duodenum besar duodenum dalam bentuk papillitis stenosis, batu yang terselubung dan tumor kanser.

Meningkatkan aktiviti amilase dalam penyakit dan keadaan lain

Kadang-kadang anda perlu menghadapi situasi di mana tidak ada masalah yang jelas dengan pankreas, tetapi penunjuk alfa-amilase dan diastase melebihi jangkaan biasa. Ini bermakna terdapat:

• Kesilapan dalam diet;
• Penggunaan minuman beralkohol;
• Pembacaan cholecystitis kronik dan proses keradangan di hati;
• Kehamilan ektopik;
• Penyakit radikal yang merosakkan organ perut (ulser berlubang, usus buntu, peritonitis, halangan usus, dan lain-lain);
• Jangkitan virus disertai oleh polglandulitis (pelbagai perubahan keradangan di hampir semua saliva dan pankreas). Ia berlaku dengan parotitis, cytomegaly dan jangkitan virus Epstein-Barr.

Kurangkan

Decryption of tests, hasil yang mencatatkan pengurangan aktiviti amilase darah, jarang diperlukan. Tetapi, kadang-kadang anda perlu menghadapinya. Ini boleh dilakukan dengan:

• Pemusnahan pankreas yang lengkap atau hampir lengkap akibat nekrosis pankreas;
• Transformasi kanser sebahagian besar pankreas, di mana terdapat praktikal tiada sel normal dengan kebolehan fungsi yang dipelihara;
• Pembuangan seluruh reseksi pankreas keseluruhan atau subtotal;
• Gangguan genetik aktiviti enzim dalam badan (fibrosis kistik).

Tahap amilase dalam darah dan diastase kencing adalah perwatakan yang boleh dipercayai yang menunjukkan arah laluan diagnostik untuk penyakit pankreas. Penilaian yang tepat ujian dengan kombinasi perbandingan hasil penyelidikan lain meninggalkan sedikit peluang untuk beberapa penyakit yang tidak diketahui.

Nilai klinikal dan diagnostik untuk menentukan aktiviti alfa-amilase

Dalam darah dan air kencing

Aktiviti darah alpha-amylase dan air kencing pada siang hari (serta dari satu hari ke hari lain) berbeza dengan ketara. Di samping itu, perbezaan individu yang signifikan dari petunjuk ini diperhatikan dalam subjek tanpa patologi organ-organ pencernaan. Memandangkan turun naik dalam perkumuhan alpha-amylase dalam air kencing, disyorkan untuk menyiasat aktiviti enzim dalam air kencing yang dikumpul setiap hari.

Perubahan dalam aktiviti alfa-amilase dalam darah dan air kencing berlaku semasa kehamilan. Hyperamalasemia. Aktiviti alpha-amylase meningkat dengan ketara dengan penyakit pankreas. Dalam pancreatitis akut, aktiviti enzim dalam darah dan air kencing meningkat 10-40 kali. Hyper-amylasiemia berlaku pada permulaan penyakit, mencapai maksimum 12-24 jam selepas pembangunan, kemudian berkurangan dengan cepat dan mencapai norma sebanyak 2-6 hari.

Aktiviti enzim boleh ditingkatkan dalam beberapa penyakit yang mempunyai gambaran klinikal yang sama dengan pankreatitis akut, iaitu: apendisitis akut, peritonitis, dan ulser gastrik dan duodenal berlubang. Pada pesakit dengan peritonitis, peningkatan aktiviti amilase adalah akibat daripada perkembangan bakteria pembentuk amilase. Biasanya, aktiviti enzim dalam keadaan patologi ini meningkat sebanyak 3-5 kali.

Penyakit yang menyebabkan hiperamilasemia yang agak kecil daripada bukan pankreas (sama ada secara langsung mempengaruhi pankreas itu sendiri) termasuk cholecystitis, cholelithiasis, keadaan yang berkaitan dengan pecah pundi hempedu, penyakit buah pinggang, kegagalan buah pinggang, metastasis tumor kanser di dalam paru-paru, dan kerosakan kelenjar liur. dengan pengambilan saluran mereka (gambaran klinikal parotitis jelas menjadikannya mudah untuk menjelaskan hyperamylasemia), prostatitis, kecederaan otak traumatik, kejutan trauma, luka bakar, pneumonia, ketoacidosis diabetes, pengguguran, tempoh selepas operasi.

Aktiviti alpha-amylase dalam serum juga meningkat dengan perforasi esophagus, ulser gastrik, gastritis, halangan usus akut, iskemia dan infarksi usus kecil, peritonitis, pecah tiub semasa kehamilan ektopik, salpingitis, aneurisme aorta.

Penyebab utama hiperamilasemia adalah: aliran keluar rembesan terjejas dari kelenjar (pengeluar alfa-amilase), meningkatkan kebolehtelapan penghalang histoematogen dalam kelenjar, nekrosis tisu, pembebasan enzim terjejas melalui penapis buah pinggang.

Beberapa hormon lain dan banyak ubat farmakologi, terutamanya ejen-ejen yang membawa kepada pengurangan sphincter Oddi, menyebabkan adrenalin: adrenalin, histamin, secretin, furosemide, salisilat, antikoagulan, morfin, pantoporam, opium, kodin, tetracycline, dan juga alkohol.

Walaupun hiperamilasemia hampir selalu disertai oleh peramylazuria, penentuan aktiviti alfa-amilase air kencing mungkin tidak selalu menjadi penunjuk diagnostik yang tepat, kerana pelepasan amilase ke dalam air kencing dikaitkan dengan fungsi ginjal. Di samping itu, buah pinggang mengeluarkan hanya 24% daripada amilase yang disembur oleh kelenjar pencernaan daripada darah.

Kajian mengenai aktiviti alfa-amilase dalam air kencing setiap hari adalah ujian biokimia yang lebih dipercayai untuk mengesan penyakit pankreas daripada kajian berdasarkan analisis satu bahagian daripadanya. Selepas aktiviti darah alpha-amylase selepas serangan pankreatitis kembali normal, ia boleh terus meningkat dalam air kencing sehingga 7 hari.

Koefisien "aktiviti alpha-amilase darah / aktiviti alfa-amilase urin" adalah penunjuk kegunaan fungsi penapis buah pinggang.

Hypoamylamine dalam amalan klinikal adalah jarang berlaku. Ia dilihat pada pesakit dengan penyakit hati (hepatitis, sirosis), tumor ganas (terutamanya dengan kehadiran metastasis dalam hati), luka bakar yang meluas, kulit, kencing manis, hipotiroidisme, gangguan makan biasa, penurunan berat badan, cachexia, dan juga di bawah pengaruh mabuk ( contohnya, jika berlaku toksikosis pada wanita hamil). Pengurangan dalam aktiviti alfa-amilase paling sering menunjukkan kekurangan fungsi exocrine kelenjar sub-gastrik. Pengenalan citrates dan oxalates membawa kepada penurunan aktiviti enzim.

Penentuan jumlah aktiviti dehidrogenase laktat

Lactate dehydrogenase (L-laktat; NAD-oxidoreductase, EC 1.1.1.27) adalah enzim glikolitik (cytosolic zinc-containing) (berat molekul 135,000 D) yang dapat mengalihkan pengoksidaan L-laktat kepada asid piruvat. Peserta yang diperlukan dalam tindak balas ini ialah nikotin adenine dinucleotide yang teroksidasi, digunakan sebagai kofaktor enzim yang memainkan peranan sebagai penerima hidrogen.

Reaksi yang dipangkin oleh laktat dehidrogenase boleh diwakili seperti berikut:

SNSNONSOO "+ OVER + Lactate dehydrogenase SNSSOSOO '+ OVER • H + H +

Enzim ini diedarkan secara meluas kepada manusia. Mengikut tahap penurunan aktiviti enzim, organ dan tisu boleh diatur mengikut susunan berikut: buah pinggang, jantung, otot rangka, pankreas, limpa, hati, paru-paru, serum darah. Di dalamnya, beberapa protein berbeza (isoenzim) telah didapati mempunyai sifat katalitik enzim ini. Perubahan dalam struktur bahagian protein isoenzim menentukan sifat fizikokimia yang berbeza (khususnya, pergerakan elektroforetik yang berbeza dalam agar, kanji, polyacrylamide dan gel lain).

Dalam plasma (serum) darah, lima laktat dehydrogeaza isoenzymes - LDG1, LDG2, LDGz, LDG4, LDG5 - telah dikenal pasti, yang terletak di gel dalam mengurangkan susunan mobiliti electrophoretic mereka.

Setiap isoenzim adalah tetramer yang dibentuk oleh subunit H dan M. Ia telah ditetapkan bahawa pecahan LDH1 diperoleh terutamanya dari tisu jantung, LDH5 - dari hati. LDH dalam sitoplasma sel dan serum diwakili oleh 5 isoenzim.

Subunit M ditemui terutamanya dalam tisu dengan metabolisme anaerob, manakala subunit H hadir dalam tisu dengan dominasi proses aerobik. Kaedah elektroforesis pada pembawa membantu membahagi semua 5 isoenzim LDH, yang mewakili peratusan berikut dalam serum darah orang yang sihat: LDH; (14-26%), LDH ^ (29-39%), LDHs (20-26%), LDH4 (8-16%), LDHs (6-16%) - V.N. Titov et al. (1988).

Laktat dehidrogenase terkandung bukan hanya dalam plasma, tetapi juga dalam jumlah yang besar dalam sel darah merah, jadi serum yang digunakan untuk analisis mesti segar, tanpa sebarang hemolisis.

Kaedah untuk menentukan jumlah aktiviti LDH dibahagikan kepada dua kumpulan utama: 1) kinetik, berdasarkan ujian Warbur-optik (kesan optik yang berkaitan dengan penukaran NAD kepada NAD • N, dan sebaliknya) dan 2) kaedah yang menentukan jumlah produk yang terbentuk atau menggunakan substrat selepas tempoh inkubasi tetap (kaedah titik akhir).

Kerja No. 32 Kaedah dinitrophenylhydrazine warna untuk menentukan aktiviti laktat dehidrogenase dalam serum darah (menurut Sevel dan Tovarek)

Prinsip kaedah ini. L-laktat dalam medium alkali dengan kehadiran serum LDH dan tambah NAD dioksidakan kepada piruvat. Mengikut tahap pembentukannya dan dinilai atas aktiviti enzim.

Reagen

1. 0.45 mol / l larutan asid natrium laktik. Dalam kuah volumetrik dengan kapasiti 100 ml, tambah 5 ml asid laktik pada kepekatan 800 g / l dan 10 ml asid laktik pada kepekatan 400 g / l dan menetralkannya dengan larutan natrium hidroksida 2N kepada tindak balas yang lemah alkali dengan pH 7.5 (menggunakan phenolphthalein perlu membangunkan lemah warna merah jambu). Volum dibawa ke tanda dengan air sulingan.

2. 0.03 mol / l larutan natrium pirofosfat, pH 8.8. Dalam kuah volumetrik dengan kapasiti 500 ml menyumbang 6,69 g Na₂ R₂O₅ • N₂Sekitar 50 ml diet air yang dicairkan, campurannya dicampur dengan sempurna dan pH larutan diselaraskan kepada 8.8 dengan penyelesaian 1N HCl. Kelantangan kandungan kelalang diselaraskan dengan tanda dengan air sulingan. Reagen stabil selama satu bulan apabila disimpan dalam peti sejuk.

3. Penyelesaian NAD. 3 mg NAD (kimia tulen) dibubarkan dalam 1 ml air sulingan (pada kadar 0.6 mg setiap sampel). Reagen stabil selama 4 minggu apabila disimpan di dalam peti sejuk.

4. Larutan 2,4-dinitrophenylhydrazine. 19.8 mg 2,4-dinitrophenylhydrazine dibubarkan dalam jumlah kecil larutan asid hidroklorik 1N dengan memanaskan campuran dalam mandi air. Selepas penyejukan, jumlahnya diselaraskan kepada 1 ml dengan asid hidroklorik 1N. Keesokan harinya, reagen itu ditapis. Penyelesaian itu disimpan dalam hidangan kaca gelap, ia boleh digunakan untuk setahun.

5. 0.4 n larutan natrium hidroksida.

6. 1 n larutan asid hidroklorik.

7. Larutan asid pyruvic standard. 11 mg asid asid piruvat kristal dibubarkan dalam sedikit air suling, dipindahkan ke dalam 100 ml kuah volumetrik, dan isipadu larutan dibuat pada tanda dengan air sulingan. Larutan 1 ml mengandungi 110 μg natrium piruvat, yang bersamaan dengan 88 μg asid piruvat. Penyelesaian standard kerja disediakan dengan mencairkan 10 kali utama dengan air sulingan. Dalam 1 ml penyelesaian kerja 8.8 μg asid piruvat.

Kursus penentuan. 0.1 ml serum dicairkan 1: 2 dicampur dengan 0.3 ml larutan NAD dan dipanaskan selama 5 minit pada suhu 37 ° C. Kemudian 0.8 ml penyelesaian pemanasan asid fosfat dan 0.2 ml larutan asid laktik, yang sebelum ini dipanaskan pada 37 ° C Campuran diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 15 minit. Selepas pengeraman, sampel diisi dengan 0.5 ml 2,4-dinithophenylhydrazine dan disimpan pada suhu bilik selama 20 minit. Kemudian tambah 5 ml larutan natrium hidroksida, campuran kandungan tiub dan selepas 10 minit

Penyerapan diukur dalam julat panjang gelombang 500-560 nm, contohnya, pada PEC dengan penapis cahaya hijau dalam cuvet dengan ketebalan lapisan 10 mm. Catat kepadatan optik sampel, dengan mengambil kira kawalan penyerapan.

Sampel kawalan dimasukkan dengan cara yang sama seperti eksperimen, tetapi serum 1: 2 dicairkan ditambah selepas menginkubkan campuran. Kirakan aktiviti enzim mengikut graf penentukuran. Aktiviti dehidrogenase laktat dinyatakan dalam mmol asid piruvat, yang dibentuk oleh inkubasi 1 l serum selama 1 jam pada suhu 37 ° C.

Untuk mendapatkan data untuk membina graf penentukuran, anda mesti melakukan perkara berikut. Dari penyelesaian piawai asid natrium piruvat, sediakan sebatian pencairan (Jadual 2). Kemudian tuang 0.5 ml larutan 2,4-dinitrophenylhydrazine dalam tiub. Seterusnya, proseskan sampel standard dengan cara yang sama seperti yang dialami.

Apabila meletakkan sampel kawalan, tambah 0,6 ml air suling, 0.8 ml larutan pirofosfat dan 0.5 ml larutan 2,4-dinitropenenilhrazrazin ke tiub. Seterusnya, sampel itu juga dialami.

Untuk mencari indikator aktiviti dehidrogenase laktat dalam dimensi "mmol asid piruvat setiap 1 liter serum setiap 1 jam inkubasi pada 37 ° C", bilangan μmol asid piruvat dalam sampel standard didarabkan dengan faktor 120 atau jumlah μg asid piruvat - sebanyak 1.41.

Untuk menyatakan aktiviti enzim dalam unit dimensi baru, anda boleh menggunakan formula lain:

Laktat aktiviti dehidrogenase dalam mmol / (h • l) = C • 120: 88,

di mana C adalah jumlah μg asid piruvat dalam sampel, 120 adalah faktor penukaran μg asid piruvat menjadi mg, 88 adalah faktor untuk menukarkan petunjuk dari mg ke mmol.

Apabila membina graf penentukuran pada paksi abscissa, nilai aktiviti enzim dinyatakan, dinyatakan dalam dimensi, mmol DCH • l) dan dibentangkan dalam lajur terakhir jadual 33. Hubungan garis lurus di antara kepekatan asid piruvat dan ketumpatan optik ialah dari 0 hingga 10 mmol / (h • l).

Nilai klinikal dan diagnostik untuk menentukan aktiviti amilase

Amilase adalah enzim yang memecahkan kanji dan glikogen. pankreas dan kelenjar air liur adalah terkaya. Kandungan amilase serum dikaitkan dengan pengambilan makanan: pada siang hari, aktiviti lebih tinggi daripada pada waktu malam.

Aktiviti amilase dalam peningkatan serum (hyperamylasemia) dengan:

Pankreatitis akut (10-30 kali, normal hingga 6-7 hari, jika aktiviti kekal meningkat selama lebih daripada 5 hari, ini menunjukkan perkembangan proses kronik);

Pembacaan pankreatitis kronik;

Parotitis (keradangan kelenjar air liur);

Mungkin disebabkan oleh alkohol, adrenalin, ubat-ubatan.

Pengurangan aktiviti amilase dalam serum (hypoamylasemia) diperhatikan apabila:

Penyakit hati (hepatitis, jaundis obstruktif, sirosis);

Peningkatan aktiviti dalam air kencing (hyperamlase) diperhatikan apabila:

Pankreatitis akut (mempunyai nilai diagnostik yang lebih besar daripada definisi dalam serum, kerana ia berlangsung lebih daripada 7 hari);

Penurunan aktiviti enzim dalam air kencing (hypoamylase) diperhatikan apabila:

Jawab soalan-soalan:

Namakan tapak penyetempatan, pH optimum dan nilai biologi amilase.

Tulis tindak balas yang amilase catalyzes.

Apakah kelas enzim amilase?

* Apakah penyakit utama yang dicirikan oleh peningkatan amilase. Terangkan sebabnya.

* Beritahu kami tentang sebab, jenis, diagnosis makmal dan pencegahan pankreatitis.

3.8. Kerja praktikal "Penentuan aktiviti aminotransferase serum".

Objektif kerja praktikal:

untuk mengkaji nilai klinikal dan diagnostik untuk menentukan serum aminotransferase;

belajar menentukan aktiviti aminotransferases dalam serum.

Tugas untuk kerja bebas:

Tulis dalam buku nota prinsip dan metodologi kerja praktikal.

Melengkapi tempat kerja untuk kerja praktikal.

Adakah kerja praktikal.

Buat pengiraan yang diperlukan.

Isi borang analisis. Rate hasilnya.

Buat kesimpulan mengenai kerja dan lukisan.

Jawab soalan tambahan.

Sebagai hasil daripada transamination, yang berlaku di bawah tindakan Asat dan AlAT, terbentuknya oksaloacetik dan piruvat. Apabila penyelesaian 2,4-dinitrophenylhydrazine ditambahkan, proses enzimatik berhenti dan hidrazon asid piruvat muncul. Dalam medium alkali, mereka memberikan pewarnaan, keamatan yang berkadar dengan jumlah asid piramid yang terbentuk.

1. Rujukan larutan asid natrium piruvat - 2 mmol / l.

2. 2,4 - dinitrophenylhydrazine - 1 mmol / l.

3. Natrium hidroksida - 0.4 n..

4. Substrat Asat / Alat.

2. FEC, cuvettes per cm.

4. rak tiub ujian.

5. Pipet untuk 1 dan 5 ml.

Mengendalikan kajian aktiviti aminotransferase dalam serum mengikut jadual.

Nilai diagnostik untuk menentukan aktiviti amilase serum

Pada manusia, alpha-amylase dirembes oleh pankreas dan kelenjar air liur, aktiviti kecilnya terdapat pada tisu hati dan otot rangka. Jisim molekul alpha-amilase agak rendah, tidak seperti kebanyakan enzim, ia ditapis dalam glomeruli buah pinggang dan terkandung di dalam air kencing. Alpha-amylase terdiri daripada dua isoenzim: jenis pankreatik (P - jenis) dan saliva (S - jenis). Pada orang yang sihat, serum menyumbang kira-kira 70% daripada aktiviti amilolitik dalam isoenzyme saliva, dalam air kencing, kira-kira peratus yang sama adalah isoamylase pankreas.

Hyperamilasemia dan hyperamalazuria diperhatikan dalam banyak penyakit, tetapi paling ketara dalam pancreatitis akut, di mana aktiviti meningkat terutamanya (sehingga 90% atau lebih) disebabkan oleh isoenzyme pankreas. Dengan penyakit ini, jumlah amilase tertinggi dalam darah dan air kencing diperhatikan pada 1-3 hari pertama. Hepatitis virus dan kanser pankreas juga menyebabkan hiperamilazuria pankreas yang berasal dari pankreas.

Dengan hiperamilasemia bukan pankreas, termasuk kerosakan kelenjar air liur, kegagalan buah pinggang. Sebab-sebab peningkatan b-amilase dalam darah adalah rembesan merosakkan kelenjar yang mengandungi b-amilase, kekurangan perkumuhan ginjal amilase dari tubuh.

Banyak bahan farmakologi, kortikosteroid, salisilat, tetracycline, furosemide, histamine menyebabkan hyperamalasemia. Untuk darah b-amilase dicirikan oleh variasi intra-dan interindividual yang luas. Yang paling bermaklumat ialah definisi isoamylase pankreatik.

Perubahan dalam aktiviti alpha-amylase dalam patologi.

Penentuan aktiviti alpha-amylase memperoleh nilai klinikal dan diagnosis dalam diagnosis dan pemantauan penyakit pankreas, sistem pencernaan, merosakkan organ-organ rongga perut. Dalam sesetengah kes (contohnya, dalam penyakit pankreas), aktiviti hanya satu isoenzyme, alpha-amylase pankreas, adalah kepentingan diagnostik; apabila memantau penyakit saluran pencernaan, perlu membandingkan aktiviti enzim dalam serum (aktiviti penyembuhan dan penyerapan tambahan dari rongga perut) dan air kencing (selalunya tahap amilazuria adalah lebih stabil dan penunjuk jangka panjang daripada amilasemia).

Nilai-nilai aktiviti alfa-amilase yang tinggi dapat dilihat dengan:

Penyakit pankreas radang (pancreatitis reaktif, bengkak, kronik, reaktif). Hyper-amylasemia biasanya akut (10-40 kali lebih tinggi), tetapi selalunya pendek, hiperamilase juga penting, tetapi tahap alfa-amilase dalam air kencing berkurangan lebih perlahan daripada plasma darah (serum). Harta ini mudah digunakan apabila pemeriksaan diagnostik "terlambat" terhadap pesakit dengan tanda klinis pankreatitis, bagaimanapun, untuk memantau prosesnya, aktiviti enzim biasanya diukur dalam kedua-dua cecair biologi. Perlu diingatkan bahawa bentuk luka pankreas yang teruk dengan ancaman tisu nekrosis, serta pankreatitis, disertai dengan gangguan serius metabolisme lipid, boleh disertai dengan nyata atau palsu (disebabkan oleh perencatan amylase oleh triacylglycerides) penurunan dalam aktiviti enzim. Oleh itu, jika ada bentuk pancreatitis yang disyaki, diagnostiknya penting bukan sahaja untuk menentukan aktiviti alfa-amilase dalam air kencing dan serum, tetapi juga untuk mengira pelepasan amilazo-kreatinin dengan formula:

Dalam pankreatitis akut, nilai terhitung ini melebihi 6%. Pengiraan pelepasan membolehkan anda tidak membuat pembetulan untuk jumlah dan masa pengumpulan air kencing dan membuat keputusan kurang bergantung pada kaedah penentuan yang digunakan.

Penyakit rongga perut, dengan gejala yang sama dengan pankreatitis akut: apendisitis akut, peritonitis, ulser gastrik berlubang dan ulser duodenal. Aktiviti alpha-amylase meningkat sekitar 3-5, jarang sekali dengan 10 kali, penyebab utama hyperaemiasemia tidak banyak peningkatan rembesan enzim, sebagai penyerapan sekunder dari organ perut ke dalam darah. Untuk membezakan diagnosis, penentuan alpha-amylase dan kreatinin dalam air kencing dan pengiraan pelepasan kreatinin menggunakan formula di atas dijalankan. Pada nilai pelepasan yang berterusan dari 1 hingga 4%, ia harus disyaki penyakit organ-organ perut, yang menyamar sebagai pankreatitis akut.

Atas sebab yang sama, aktiviti alfa-amilase meningkat dengan ketara dengan perforasi esophageal, gastritis, halangan usus akut, iskemia dan infarksi usus kecil, pecah tuber, salpingitis, aneurisme aorta.

Dalam penyakit organ-organ dalaman yang tidak berkaitan secara langsung dengan sistem pencernaan, peningkatan sederhana dalam aktiviti jumlah alpha-amilase dan / atau isoenzimnya adalah mungkin. Penyakit ini termasuk: cholecystitis, cholelithiasis, kerosakan pada parenchyma buah pinggang dan penyakit keradangan organ ini, kegagalan buah pinggang, prostatitis, ketoacidosis diabetik, metastasis tumor ganas dalam tisu dan organ (terutamanya dalam paru-paru, pankreas, kolon melintang). Untuk patologi disyaki dinyatakan di atas dijalankan analisis perbandingan menyeluruh dan pankreas alpha-amylase, kerana penyakit yang dinyatakan secara umumnya meningkatkan aktiviti selivarnogo isoenzyme (dalam luka-luka kanser dan prostatic melintang kolon peningkatan aktiviti kedua-dua - P- dan S-isoenzim, yang membolehkan untuk membezakan daripada penyakit keradangan organ yang sama).

Hyperamalasemia bukan berasal dari pankreas juga berlaku dalam penyakit kelenjar air liur dan patologi otak tertentu. Dalam kes ini, meningkatkan jumlah aktiviti alpha-amylase juga berlaku dengan meningkatkan aktiviti isoenzyme air liur dan pembezaan diagnosis perlu dijalankan selari dengan pengukuran jumlah dan pankreas alpha-amylase (sekurang-aktiviti P-amylase biasa boleh disyaki patologi yang dinyatakan di atas).

Analisis perbandingan aktiviti alpha-amylase dalam air kencing dan serum juga merupakan parameter diagnostik berharga dalam menilai patologi buah pinggang. Dalam luka-luka fungsi penapis buah pinggang (untuk sindrom nefrotik, glomerulonephritis, dll) Aktiviti alfa-amilase dalam air kencing ketara menurun, manakala darah ditunjukkan hyperamylasemia sederhana atau besar, bagaimanapun coefficient "Amylase serum / amilase air kencing" adalah parameter diagnostik utama dengan patologi ini.

Keadaan pasca operasi (tindak balas keradangan sistemik ke pembedahan, perkembangan ARDS, dan lain-lain) juga boleh menjadi punca hiperamilasemia sederhana.

Pengurangan dalam aktiviti alfa-amilase biasanya mengiringi penurunan fungsi fungsional pankreas, yang disebabkan oleh kerosakan kepada parenchyma organ dan / atau peraturan exocrine yang terjejas, dan paling sering berlaku apabila:

Perubahan nekrotik dalam pankreas yang berkaitan dengan pankreatitis hemorrhagic dan nekrosis pankreas total.

Dengan penyakit hati (hepatitis, sirosis). Tumor ganas, terutamanya dalam metastasis hati.

Ketidakseimbangan endokrin yang teruk: hipotiroidisme, diabetes mellitus, hiperklipemia (terutamanya dengan lebihan triacylglycerides, disebabkan oleh perencatan pusat aktif enzim), dengan gangguan pemakanan umum, cachexia, dan toksikosis wanita hamil.

Dalam sesetengah kes, dengan patologi yang diterangkan di atas, aktiviti serum alpha-amilase mungkin tidak berkurangan, tetapi tetap tidak berubah.

Hubungan utama dalam diagnosis pembezaan patologi dengan gejala yang sama.

Nisbah yang paling umum ialah:

Jumlah alpha-amilase / pankreas. Digunakan dalam diagnosis pembezaan proses keradangan dan malignan di dalam organ perut dan beberapa tisu lain. Dalam proses radang, tidak menyentuh pankreas, sumber utama aktiviti daripada jumlah enzim alpha-amylase adalah selivarny, jadi nisbah "jumlah amilase / isoform pankreas '> 1. Dalam luka malignan sumbangan perut kedua-dua isoenzim adalah lebih kurang sama, dan berkata nisbah lebih kurang 1 8-2.4. Dengan penglibatan pankreas dalam proses keradangan atau kehadiran metastasis tumor di dalamnya, nisbah aktiviti amilase total dan pankreas tidak melebihi 1.5.

Jumlah alfa-amilase / kreatinin dalam air kencing dan serum. Pelepasan yang dikira digunakan (formula diberikan dalam perenggan 3), membolehkan membezakan proses keradangan di pankreas (nisbah melebihi 6%) dan organ perut (1-4%).

Jumlah serum alfa-amilase / Total urin alpha-amylase. Digunakan untuk menilai aktiviti berfungsi penapis buah pinggang. Dalam sindrom nefrotik dan glomerulonefritis, pekali lebih tinggi daripada 2-2.5.

Serum total alpha-amylase / Serum Triglycerides. Nisbahnya adalah "songsang", kerana lebihan triacylglycerides dapat menghalang aktiviti alpha-amilase. Ia membolehkan untuk membezakan penurunan patologi dalam pengeluaran enzim dan gangguan pada hiperipia.

Jumlah serum alpha-amylase / Lipase pankase. Makna biologi dan diagnostik pekali adalah serupa dengan nisbah sebelumnya, kerana kehadiran triacylgliserida bebas dalam serum secara langsung berkaitan dengan aktiviti lipase pankreas. Peratusan ini langsung.

Perubahan dalam aktiviti alfa-amilase pada orang yang sihat. Gangguan dengan dadah.

Aktiviti alpha-amilase dalam plasma darah orang yang sihat secara substansial bergantung kepada jenis diet dan makanan yang berlaku dalam diet. Di samping itu, parameter ini sangat bergantung kepada intensiti proses metabolik dalam individu tertentu, serta aktiviti otak subjek. Oleh itu, aktiviti enzim pada individu yang sama pada masa yang berlainan (walaupun pada hari yang sama) boleh berbeza-beza dalam lingkungan 25-50% di kedua-dua arah.

Hyper-amylasemia pada orang yang sihat boleh disebabkan oleh keadaan emosi (tekanan, peningkatan aktiviti mental), minum (walaupun sekali) alkohol, dan juga berkaitan dengan diet yang kaya dengan protein dan habis karbohidrat dan gula. Hypoamylasemia berlaku dengan peningkatan penggunaan glukosa, dengan puasa, senaman aktif, dan juga pada orang-orang dengan hiperlipidemia, walaupun tanpa manifestasi klinikalnya.

Dalam kehamilan selama 19 minggu, aktiviti alfa-amilase diturunkan berbanding dengan norma, dari segi kehamilan 33-34 minggu, tahap peningkatan aktiviti, dan pada minggu ke 37-40 ia stabil pada tahap 10-20% lebih tinggi daripada aktiviti enzim pada wanita yang tidak hamil.

Aktiviti alpha-amylase dan isoenzyme pankreas juga sangat dipengaruhi oleh penggunaan ubat-ubatan biasa yang digunakan oleh orang-orang yang sihat dalam keadaan penyakit berjangkit dan inflamasi sementara - contohnya, antibiotik tetracycline, furosemide, ubat-ubatan anti-radang kortikosteroid, salisilat.

Juga, kesan yang signifikan terhadap aktiviti alfa-amilase mempunyai ubat-ubatan yang membawa kepada pengurangan sphincter Oddi, termasuk hormon (adrenalin, histamin, secretin), bahan narkotik (morfin, pantopon, opium, codeine) dan ubat lain yang meningkatkan rembesan enzim dan menyekat aliran keluar rembesan dari pankreas.

Berdasarkan biofile.ru

Prinsip kaedah: Maltotriosida yang berkaitan dengan kromogen 2-kloro-p-nitrophenol digunakan sebagai substrat untuk α-amilase. Di bawah tindakan a-amilase, substrat itu dihidrolisiskan untuk melepaskan 2-chloro-p-nitrophenol berwarna, maltotriosa dan glukosa. Tindak balas itu berlaku dengan cepat dan tidak memerlukan kehadiran koenzim dalam campuran tindak balas. Kadar hidrolisis substrat adalah berkadar terus dengan aktiviti a-amilase dalam sampel dan diukur spektrofotometri pada panjang gelombang 405 nm.

Substrat-CNF ----> CNF + Glukosa + Maltotriose

Linearity kaedah: sehingga 1500 U / l.

a-Amilase dalam serum tidak hemoletik kekal stabil pada suhu bilik (18-25 ° C) selama 7 hari, pada suhu penyimpanan 2-8 ° C selama 2 bulan.

1) Spektrofotometer dengan cuvette dikawal suhu, panjang gelombang 405 nm, panjang jalur optik 1 cm; suhu reaksi 37 ° C;

3) Pipet automatik untuk 25 μl dan 1000 μl;

Cecair salivary juga boleh digunakan sebagai sumber enzim (air liur dicairkan sebanyak 100 kali dengan air suling), tetapi pelbagai norma sangat berbeza.

6) Reagen bekerja (substrat - 1.8 mmol / l dalam penyekat MES (pH 6.0 ± 0.1)).

Reagen bekerja sesuai digunakan jika ketumpatan optiknya tidak lebih tinggi daripada ketumpatan optik 0,6 unit. pada panjang gelombang 405 nm dan tidak ada kekeruhan.

Sebelum analisis, reagen hendaklah dipanaskan kepada suhu pengukuran (37 ° C).

Aduk kandungan tiub dan hidupkan jam randik. Ukur ketumpatan optik sampel terhadap air suling pada panjang 405 nm tepat pada 1 minit. Ulangi pengukuran 3 kali dengan selang 1 min. Kirakan perubahan ketumpatan optik setiap minit, dan kemudian hitung pengukuran purata ketumpatan optik setiap minit (Dop / min).

Pengiraan aktiviti faktor a-amilase yang dijalankan oleh formula:

di mana Dop / min ialah perubahan purata dalam ketumpatan optik setiap minit;

1,025 - jumlah larutan dalam cuvette;

1000 adalah faktor penukaran ml kepada l;

12.9 - pekali penyerapan milimolar 2-chloro-p-nitrophenol;

0.025 adalah jumlah serum dalam ml;

1.0 ialah panjang laluan optik.

Apabila membuat apa-apa perubahan kepada parameter yang disenaraikan, faktor itu perlu dikira semula. Jika aktiviti a-amilase melebihi 1500 U / l (satu titik di luar garis lurus graf penentukuran), serum yang dianalisis harus diencerkan 1: 1 dengan larutan garam dan pengukuran harus diulang, dan hasil pengiraan perlu didarabkan dengan 2.

Nilai klinikal dan diagnostik: a-Amylase adalah endohydrolase dan di dalam tubuh manusia diwakili oleh beberapa isoenzim: enzim dirembeskan oleh kelenjar air liur (S-jenis), pankreas (P-jenis); Aktiviti enzim kecil boleh didapati di hati, otot rangka, cecair air mata, rembesan kelenjar susu dan pelbagai tumor.

Aktiviti a-amilase dalam serum meningkat dengan ketara disebabkan oleh P-isoenzyme dalam pelbagai penyakit pankreas (pancreatitis, abses, trauma, kanser).

Dengan kecederaan kelenjar air liur (kanser kelenjar salivary, parotitis endemik, makroamilasemia), aktiviti serum a-amilase juga meningkat, tetapi dengan perbelanjaan S-isoenzyme.

Kedua-dua isoenzim a-amilase mempunyai berat molekul kecil (45,000), jadi ia ditapis dalam buah pinggang dan diekskresikan dalam air kencing. Peningkatan aktiviti amilase air kencing (diastasis) dalam pankreatitis akut berlaku 6-10 jam kemudian daripada dalam serum darah.

Berdasarkan biohimist.ru

Prinsip kaedah ini. Alpha-amylase memangkinkan hidrolisis substrat kanji berwarna tidak larut untuk membentuk pewarna larut air biru. Jumlah pewarna yang dikeluarkan adalah berkadar dengan aktiviti enzim.

Kursus penentuan. Untuk menentukan aktiviti alfa-amilase dalam serum atau air kencing disediakan dalam sampel eksperimen dan kawalan selari dan dianalisis dalam urutan berikut:

Sampel bercampur, dibiarkan selama 15 minit, disentrifugasi pada 3000 rpm selama 5 minit. Kemudian ukurkan ketumpatan optik sampel eksperimen terhadap kawalan di FEC pada panjang gelombang 590 nm dalam cuvet dengan ketebalan lapisan 5.0 mm.

Aktiviti enzim didapati pada jadual penentukuran.

Nilai klinikal dan diagnostik untuk menentukan aktiviti alfa-amilase dalam serum dan air kencing: pada manusia, alpha-amylase dirembes oleh pankreas dan kelenjar saliva, aktiviti kecilnya terdapat pada tisu hati dan otot rangka. Berat molekul enzim agak rendah ("48,000), jadi ia ditapis dalam glomeruli buah pinggang dan terkandung di dalam air kencing.

Pada orang yang sihat, aktiviti enzim serum adalah dari 140 hingga 350 U / l, dalam air kencing dari 1000 hingga 2000 U / l. Aktiviti amilase meningkat, terutamanya, dalam penyakit pankreas (dalam pankreatitis akut). Penyakit kelenjar air liur dan penyakit ginjal kronik menyebabkan peningkatan dalam aktiviti serum alpha-amilase.

Nombor kerja 5. Kesan adrenalin pada glukosa dalam darah.

Kemajuan kerja. Dalam arnab, dari urat telinga telinga atau dalam tikus dari urat ekor, 0.1 ml darah dikumpulkan dan glukosa darah ditentukan oleh kaedah o-toluidine.

Kemudian, haiwan itu memotong rambut di sisinya, menggosok kulit dengan alkohol dan larutan adrenalin 0.1% diambil subcutaneously pada kadar 0.1 ml setiap 1 kg berat badan, dan selepas 30 minit glukosa darah diukur semula.

Nombor kerja 6. Kesan insulin terhadap glukosa darah.

Kemajuan kerja. Dari arnab lain dari vena telinga telinga atau dari tikus dari vena caudal, ambil 0.1 ml darah dan tentukan kandungan glukosa dalam darah.

Dalam haiwan, potong bulu di sebelahnya, perlakukan dengan alkohol dan suntikan insulin subkutan dengan kadar 1.5 unit antarabangsa setiap kg berat badan. Sejam kemudian, menentukan semula glukosa darah. Memperkenalkan haiwan subcutaneously dengan 5% penyelesaian glukosa untuk mencegah kejutan insulin: 10 ml arnab, tikus - 1 ml.

Hasil kerja ke-3 dan ke-4 bekerja di meja dan membuat kesimpulan.

Berdasarkan bahan www.ronl.ru

α - Amilase (diastase, 1,4 - a - D - glucan hydrolase, EC 3.2.1.1.) memangkinkan hidrolisis ikatan α - 1,4 - glukosida kanji, glikogen dan polisakarida yang berkaitan dengan maltosa, dextrin dan polimer lain. Jisim molekul enzim adalah kira-kira 48,000 D. Molekul ini mengandungi atom kalsium yang bukan sahaja mengaktifkan enzim, tetapi juga melindunginya dari tindakan protease, dan aktiviti amilase meningkat dengan pengaruh ion klorin. Dalam darah, ia diwakili oleh dua isoenzim: pankreatik - P-jenis dan saliva - S-jenis, masing-masing dibahagikan kepada beberapa pecahan. Isenzyme S-jenis biasanya 45-70% (purata 57%), selebihnya adalah dalam P-jenis. Kedua-dua isoenzim mempunyai ciri-ciri katalitik dan imunologi yang hampir sama, sedikit berbeza dalam pergerakan electrophoretic, tetapi juga dipisahkan dengan penapisan gel pada DEAE - Sephadex. Terdapat juga makroamilase, yang tidak diekskresikan oleh buah pinggang, tetapi boleh didapati dalam serum darah normal (kira-kira 1% orang yang sihat) dan patologi (2.5%).

Aktiviti amilase tinggi diperhatikan dalam parotid dan pankreas. Walau bagaimanapun, aktivitinya, walaupun jauh lebih rendah, terdapat dalam usus besar dan kecil, otot rangka, hati, buah pinggang, paru-paru, tiub fallopi, tisu adipose. Dalam darah, enzim dikaitkan dengan kedua-dua protein plasma dan membentuk unsur. Aktiviti enzim adalah sama bagi lelaki dan wanita dan tidak bergantung kepada jenis makanan yang diambil dan masa hari.

Kaedah yang sedia ada untuk mengkaji aktiviti a-amilase dalam cecair biologi dibahagikan kepada dua kumpulan besar:

1. Saccharifying (reductometric), berdasarkan kajian gula yang terbentuk daripada kanji dengan mengurangkan kesan glukosa dan maltosa.

2. Amyloclastic, berdasarkan penentuan residu kanji tepukan:

• mengikut tahap keamatan tindak balasnya dengan iodin. Kaedah ini lebih sensitif dan spesifik, tetapi ketepatan mereka sebahagian besarnya bergantung kepada kualiti kanji dan pengoptimuman syarat penentuan.
• penggantungan kelikatan kanji, tidak mempunyai ketepatan yang tinggi dan tidak digunakan sekarang.

3. Kaedah-kaedah yang menggunakan substrat kromogenik - adalah berdasarkan kepada penggunaan substrat - bahan pewarna, yang di bawah tindakan α - amilase hancur untuk membentuk pewarna larut air.

4. Kaedah berdasarkan reaksi enzim yang digabungkan:

Pati + H₂Mengenai Maltose + Maltotriose + Dextrin

Maltose + N₂Sekitar 2 glukosa

Glukosa + ATP Glukosa - 6 - F + ATP

Glukosa-6-F + NADF Gluconate-6-F + NADFN

Aktiviti enzim ditentukan oleh kadar pengumpulan NADPH.

Kaedah amyloclastic diluluskan sebagai bersatu: Karavey (dengan substrat kanji tahan) dan Smith-Rohe.

α - Amilase mempelbagaikan hidrolisis daripada substrat kanji berwarna tidak larut untuk membentuk pewarna larut air biru. Jumlah pewarna yang dilepaskan adalah berkadar dengan aktiviti pemangkin enzim.